Сибирского отделения российской академии наук
|
Скачать 1.11 Mb.
|
  ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ НАУКИИНСТИТУТ ХИМИЧЕСКОЙ БИОЛОГИИ И ФУНДАМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ СИБИРСКОГО ОТДЕЛЕНИЯ РОССИЙСКОЙ АКАДЕМИИ НАУК (ИХБФМ СО РАН) Технологический паспорт коллекции «Коллекция экстремофильных микроорганизмов и типовых культур» Новосибирск - 2017 Общая информация:
Цели и задачи – Коллекция экстремофильных микроорганизмов и типовых культур создана, поддерживается и пополняется для выполнения следующих задач:
Объем коллекции – более 3000 штаммов микроорганизмов, более 200 штаммов бактериофагов. Штаммы микроорганизмов охарактеризованы по морфологическим свойствам колоний и клеток, биохимическим свойствам, антибиотикорезистентности, проведена таксономическая идентификация по гену 16S рРНК, сведения хранятся в базах данных. Штаммы бактериофагов охарактеризованы по литическим свойствам, спектру бактерий-хозяев, для части бактериофагов определены геномные последовательности. Информацию об актуальном составе коллекции можно получить по запросу в виде вывода из электронной базы данных. АДРЕС: 630090, Россия, г. Новосибирск, Пр-т Академика Лаврентьева, 8 http://www.niboch.nsc.ru РУКОВОДИТЕЛЬ: Тикунова Нина Викторовна, д.б.н. КОНТАКТНОЕ ЛИЦО: Тикунова Нина Викторовна, Морозова Вера Витальевна тел. (383) 363-51-31 e-mail: [email protected], [email protected]
Полная версия СОПов : http://www.niboch.nsc.ru/doku.php/emtc_collection
СОП № ЛММБ 2-3-2017-09 Получение чистой культуры микроорганизма из образца Составили: к.б.н., с.н.с. В.В. Морозова, вед. инженер А.В.Бардашева Местонахождение: ИХБФМ СО РАН Пересмотр через 1 год
Настоящая методика устанавливает порядок получения чистой культуры микроорганизма для последующей идентификации и депонирования в Коллекцию ЭМТК.
Получение чистых культур микроорганизмов из различных природных образцов, включая образцы почвы, образцы от животных, растений, людей и пр., является основным этапом пополнения Коллекции ЭМТК.
СОП – стандартная операционная процедура; Асептика – комплекс мер направленных на предупреждение попадания в рабочую зону сторонних микроорганизмов; Селективные среды – питательные среды для выделения определенных микроорганизмов за счет создания благоприятных для них условий роста и неблагоприятных условий для сопутствующих микроорганизмов других видов; РПА – рыбо-пептонный агар; СМА – сердечно-мозговой агар; СМА – сердечно-мозговой агар.
7.1.1. Подготовка персонала к проведению работ – надеть медицинский халат и перчатки 7.1.2. Приготовление дезинфицирующего раствора – приготовить 3% раствор перекиси водорода, в стеклянный цилиндр налить (100±1) мл 30% перекиси водорода и довести объем до 1000 мл водопроводной водой, данный раствор может быть использован в течение 48 ч; 7.1.3. Подготовка боксового помещения к работе – обработать 3% раствором перекиси водорода поверхности помещения и оборудования до начала работ; – обработать ламинарный бокс и помещение ультрафиолетовыми лучами до начала работ в течение 15 мин. 7.1.4. Приготовление 70% раствора этилового спирта – налить в стеклянный цилиндр (70±1) мл 96% этилового спирта и довести объем до 100 мл дистиллированной водой; 7.1.5. Приготовление LB-среды для хранения культур – приготовить 50% (об./об.) раствор глицерина в дистиллированной воде; – автоклавировать при 121°С в течение 15 мин; – взвесить (3,0±0,1) г триптона, внести в мерный циллиндр; – взвесить(1,5±0,1) г дрожжевого экстракта, внести в мерный цилиндр с триптоном. Добавить дистиллированной воды до 300 мл; – разлить по флаконам градуированным; – автоклавировать при 121°С в течение 15 мин; – смешать в асептических условиях равные объемы среды LB и 50% раствора глицерина; – разлить в стерильные пробирки объемом 2 мл с завинчивающейся крышкой по 200 мкл. Инкубировать при (36±1)°С в течение 18 – 24 ч для выявления случайной контаминации. 7.1.6. Приготовление физиологического раствора – взвесить (0,90,1) г хлорида натрия, внести в мерную колбу вместимостью 100 мл и добавить дистиллированной воды до метки; – перемешать до полного растворения соли; – разлить по флаконам градуированным; – автоклавировать при 121°С в течение 15 мин. 7.1.7. Подготовка чашек Петри с питательной средой – приготовить питательную среду согласно инструкции производителя; – разлить питательную среду после автоклавирования в стерильные чашки Петри толщиной (4,00,5) мм и оставить для застывания при комнатной температуре. 7.2. Основной этап 7.2.1. Первичная микроскопия 7.2.1.1 Микроскопия нативных препаратов – обжечь предметное стекло в пламени спиртовки; – нанести небольшое количество стерильного физиологического раствора; – внести прокаленной бактериологической петлей небольшое количество образца. Петлю обеззараживают прожиганием. Сверху препарат накрыть покровным стеклом; – микроскопировать, производя первичную идентификацию по морфологическим свойствам; – погрузить препарат в 3% раствор перекиси водорода после окончания микроскопирования. Экспозиция не менее 6 ч. 7.2.1.2. Микроскопия мазков окрашенных по Грамму – обжечь предметное стекло в пламени спиртовки; – нанести небольшое количество стерильного физиологического раствора; – внести прокаленной бактериологической петлей небольшое количество образца. Петлю обеззараживают прожиганием; – оставить предметное стекло на воздухе до полного высушивания; – провести фиксацию микропрепарата: предметное стекло трижды накладывают на пламя спиртовки в верхней части на 2 секунды с интервалом 4 секунды (суммарно в пламени 6 секунд). Это позволяет убить микроорганизмы, прикрепить их к стеклу и повысить восприимчивость к красителям; – поместить на мазок полоску фильтровальной бумаги и нанести на фиксированный мазок несколько капель карболового раствора генцианвиолета (реагент 1) и выдержать 2-3 минуты. Слить краску, удалить фильтровальную бумагу и сполоснуть в проточной воде (до 30 сек); – залить мазок на 1-2 мин раствором Люголя (реагент 2) до почернения препарата; – слить раствор, мазок промыть дистилированной водой; – дифференцировать 96° спиртом, наливая и сливая его, пока отходит синяя краска и не обесцветится мазок (приблизительно 20-60 секунд). Во время дифференцировки препарат все время покачивают; – промыть тщательно стекло в дистиллированной воде 1-2 мин; – окрасить препарат дополнительно раствором сафранина (реагент 3) (несколько капель) в течение 2-3 минут для выявления грамотрицательной группы бактерий; – промыть в проточной воде и высушить фильтровальной бумагой. Грамположительные бактерии имеют сине-фиолетовый цвет (темно-синий), а грамотрицательные - розово-красный, красный или коричневый; – микроскопировать, производя первичную идентификацию по морфологическим свойствам; – погрузить препарат в 3% раствор перекиси водорода после окончания микроскопирования. Экспозиция не менее 6 ч. 7.2.2. Первичный посев на селективные среды – обработать рабочую поверхность ламинарного бокса и руки 70% раствором спирта; – при неизвестных условиях роста микроорганизмов посев проводить параллельно на трех- или четырехсекционные чашки Петри с различными питательными средами и инкубировать их после посева при различных температурных условиях и различном газовом составе окружающей атмосферы; – прокалить бактериологическую петлю в пламени спиртовки, остудить, забрать материал и густо засеять верхнее поле чашки Петри с соответствующей питательной средой, для выделения чистой культуры (Таблица 1); |
Похожие:
 |
Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «федеральный... «федеральный исследовательский центр институт цитологии и генетики сибирского отделения российской академии наук» (ИЦиг со ран) |
|
Клеточные и гуморальные механизмы опухолеспецифической иммунотерапии... Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте клинической иммунологии Сибирского... |
 |
Сбродова Дарья Викторовна Институт систем энергетики им. Л. А. Мелентьева Сибирского отделения Российской академии наук (исэм со ран) |
|
Сибирского отделения российской академии наук «Коллекция биоматериалов (днк, рнк и плазма) пациентов, страдающих мультифакторными социально-значимыми заболеваниями» |
|
Документация об аукционе в электронной форме Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химии и химической технологии Сибирского отделения Российской академии... |
|
Документация об аукционе в электронной форме Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химии и химической технологии Сибирского отделения Российской академии... |
|
Институт биофизики сибирского отделения российской академии наук (ибф со ран) Аннотированный перечень важнейших результатов исследований по «базовым проектам», выполненных в 2014 Г |
|
О проведении запроса котировок №12 от 28. 02. 2011г Полное наименование: Учреждение Российской академии медицинских наук Научно-исследовательский институт клинической иммунологии Сибирского... |
|
Документация об аукционе разработана Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем химико-энергетических технологий Сибирского отделения Российской... |
|
Кти нп со ран: отчетные материалы за 2012 г Федеральное государственное бюджетное учреждение науки конструкторско-технологический институт научного приборостроения Сибирского... |
|
Документация об аукционе разработана Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт проблем химико-энергетических технологий Сибирского отделения Российской... |
|
О проведении запроса котировок в электронной форме № зк-4/2018 Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт горного дела им. Н. А. Чинакала Сибирского отделения Российской академии... |
|
Техническое задание Описание объекта закупки Наименование юридического лица: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химии и химической технологии Сибирского... |
|
2 3 извещение о проведении аукциона в электронной форме Наименование юридического лица: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химии и химической технологии Сибирского... |
|
Извещение о проведении аукциона в электронной форме Наименование юридического лица: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химии и химической технологии Сибирского... |
|
Извещение о проведении аукциона в электронной форме Наименование юридического лица: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт химии и химической технологии Сибирского... |